朋克娱乐注册-注册登录：目的：研究茯苓的不同产地茯苓质量，为茯苓质量标准的建立及其产地开发利用提供依据。方法：（1）按照《中国药典》2015版相关方法测定茯苓中水分、灰分、浸出物含量。（2）利用紫外-可见分光光度法测定茯苓中的水溶性多糖及茯苓总三萜的含量。（3）利用高效液相色谱法测定茯苓中的茯苓酸的含量。结果：贵州统块的浸出物、茯苓总三萜、茯苓酸含量最高。云南的茯苓浸出物在3.39~3.99%之间，茯苓总三萜含量在0.25~0.30%、茯苓酸含量0.07~0.09%之间，茯苓多糖含量在0.21~0.42之间。除茯苓多糖含量外整体相差不大。安徽的茯苓浸出物在2.65~4.01%之间，茯苓总三萜含量在0.17~0.31%、茯苓酸含量0.05~ 0.08%之间，茯苓多糖含量0.13~0.42之间。
茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.) Wolf的干燥菌核，又名茯菟、茯灵、松薯、松苓等，首载于《神农本草经》，茯苓味甘、淡，性平；归心、肺、脾、肾经；具有利水渗湿、健脾安神等功效。临床上常用于水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安、惊悸失眠等的治疗。现代医学研究发现，茯苓所含的有效成分具有抗肿瘤、增强免疫力、镇静、抗衰老、利尿和保肝等作用。
茯苓为我国传统中药材，有“十药九苓”之说。据初步调查，在常用中药方剂中，茯苓的配伍率达70%，制成的中成药如子理中丸、六君子汤、归脾汤、桂枝茯苓丸等有293种。
茯苓有野生和人工栽培两个品种，主要分布于我国湖北、湖南、安徽、云南、四川、浙江、河南、福建、贵州、台湾、广西等地。长期以来，茯苓药材主要来自人工栽培。不同产地、不同生长期的茯苓中各种化学成份的含量不尽相同，其药理作用也存在差别。茯苓在中医临床及人民生活中有着广泛的使用价值，因此茯苓的商品质量评价具有重要意义。
茯苓的商品质量评价方面，文献记载多采用鉴别植物形态、性状、显微鉴别、理化实验、薄层色谱鉴别、紫外光谱等方法进行正伪品的鉴别及品质评定。2015 年版《中国药典》只收载了显微鉴别方法及理化鉴别方法，没有有效成分的定性鉴别及含量测定方法。理化鉴别反应分别检查多糖和甾醇，该鉴别反应的专属性较差。
综上所述，有必要对茯苓的质量标准规范化进行系统深入研究，以达到保证质量的目的。
茯苓中发现的化学成分主要有多糖类、三萜类、甾醇类、氨基酸、脂肪酸等, 其中报道的具有生物活性的化合物主要集中在三萜类和多糖类化合物。目前共分离鉴定了三萜类成分84种, 多糖类成分60余种。
茯苓中三萜类物质骨架主要有6种类型：羊毛甾烷型、开环羊毛甾烷型、齿孔甾烷型、羊毛甾-7,9(11)-二烯型、7,8-脱氢羊毛甾烷型和开环齿孔甾烷型。[1]
茯苓中的多糖是茯苓的主要成分,含量约占茯苓干燥菌核70-90%左右,包括水溶性多糖和碱溶性多糖。茯苓多糖类成分主要为β-茯苓聚糖和茯苓聚糖。
茯苓中含有的水溶性多糖没有毒副作用,但含量低；而碱溶性多糖含量高,水溶性小或不溶于水。为了提高茯苓多糖的利用率,对茯苓多糖进行结构改造,以增强茯苓多糖的水溶性和生物活性,提高其临床应用价值。目前,茯苓多糖衍生物主要有:羧甲基化茯苓多糖(CMP)[2]、硫酸化茯苓多糖(SP)[3]、磷酸化茯苓多糖(P-PCS3-II)[4]、羧甲基化硫酸化多糖(CS-PCS3-Ⅱ)[5]、阿魏酸茯苓多糖(FP)[6]等。
茯苓多糖能直接抑制肿瘤细胞,增强机体免疫力,主要表现在抑瘤生长、同时增强细胞免疫和体液免疫、抗脾脏增大、抗胸腺萎缩[7]；加快用药后小鼠白细胞的回升速度和造血机能的恢复速度[8]；明显增加酸性非特异酯酶的阳性淋巴细胞数、增强巨噬细胞的吞噬功能、增加脾脏抗体分泌细胞数[9];明显促进细胞生长[10]。研究表明,羧甲基茯苓多糖增强荷瘤小鼠免疫应答功能的机制可能与明显增强巨噬细胞吞噬功能、增加脾抗体分泌细胞数及T细胞的生长、增加特异抗原结合细胞数有关[11]。Chang,H等[12]从茯苓中提取分离出4种免疫调节蛋白,其中CS PCS3-Ⅱ能够增强脾的免疫力,并推测官能团对这种多糖的免疫活性调节非常重要[13]。
梁亦龙等［14］研究发现，茯苓多糖能不同程度增加血清中超氧化物歧化酶( T-SOD) 和C-SOD 的活性、能显著降低动物体内自由基水平，降低丙二醛( MDA) 含量，提高动物体内自由清除酶的活力，从而茯苓多糖可起到抗氧化、延缓动物衰老的作用。
茯苓多糖具有保肝、抗病毒、抗炎、抗癌作用及抗糖尿病作用等作用。郑彩云［15］将茯苓多糖灌胃给糖尿病模型大鼠，结果发现茯苓多糖可减缓糖尿病模型大鼠体质量的负增长，降低MDA，升高SOD，降低糖尿病模型大鼠的血糖，且与处理浓度和时间呈正相关性。
仲兆金等发现三萜类化合物能明显抑制人慢性髓样门血病细胞,可影响小鼠T淋巴细胞增殖[16]。KwonMs等发现茯苓三萜对肺癌、卵巢癌、皮肤癌、中枢神经癌和直肠癌等有明显作用[17]。茯苓素对艾氏腹水瘤、肉瘤S180和白血病L1210细胞有显著抑制作用,对小鼠Lewis肺癌的转移也有一定作用,与环磷酰胺等抗癌药合用有一定的协同作用及免疫增强作用等[18,19]。
YuS.J等研究发现茯苓甲醇提取物是通过增强免疫促进剂(IL-1β、IL-6、TNF-α)分泌和抑制免疫抑制剂(TGF-β)的分泌来实现其免疫反应[20]。
汪电雷等发现茯苓总三萜对二甲苯致小鼠急性炎症及对大鼠棉球肉芽肿亚急性炎症具有较强的抑制作用。[21]沈思等认为茯苓皮三萜可作为治疗化脓性感染药物及祛痘活性的天然护肤品来开发，因为其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌都有较好的抑制作用[22]。
茯苓总三萜可延长青霉素诱发大鼠痫性放电潜伏期, 减少痫波发放频率，减轻发作程度。[23]
茯苓三萜化合物能降血糖、抑菌、镇静、利尿，对心血管系统也有较好的治疗作用[24]。茯苓素是利尿消肿的主要活性成分,其能激活细胞膜上Na+、K+、ATP酶,而ATP酶与利尿有关[25]。
茯苓的样品：产自茯苓主产区湖南、云南、贵州、湖北等地的茯苓饮片样品21份，鲜茯苓5份。
鲜茯苓呈类球形、椭圆形、扁圆形或不规则团块，大小不一。外皮薄而粗糙，棕褐色至黑褐色，有明显的皱缩纹理。体重，质坚实，断面颗粒性，有的具裂隙，外层淡棕色，内部白色，少数淡红色，有的中间抱有松根。气微，味淡，嚼之粘牙。
目前市场茯苓饮片规格有：茯苓丁、茯苓片、茯苓块。目前市场茯苓丁的大小范围在10-12mm,茯苓块的厚度在10mm左右。茯苓片的厚度在2-5mm。
通过对饮片的外观描述结果发现，根据传统经验和市场流通经验所购买的优级茯苓饮片的色泽偏白，质地紧密，统货的色泽偏黄，质地较疏松。
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，有裂隙，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，有裂隙。味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，质坚，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，有裂隙，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，有裂隙，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，碎末较多。味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，碎末较多。味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，碎末较多。味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为不规则形片状，片面平整，色白灰，无裂隙，质坚，无臭，味淡，嚼之粘牙，无虫，无沙，无霉。
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为长方形块状，片面不平整，色棕黄色，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为正方形，长方形，少数呈不规则形，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
本品多数为长方形块状，片面平整，色白色，味淡，嚼之粘牙，无虫，无杂质，无霉
测定方法：依照《中华人民共和国药典》2015版药典通则0832第二法。取供试品2g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在100~105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。
分析结果：茯苓药材中水分含量范围为13.06%~23.13%，平均值为18.42%（参照《中国药典》2015版一部茯苓药材项下的规定值，茯苓水分含量不得过18.0%）。水分偏高的原因可能是湖南当时处于雨季，导致取样时整体偏高。测定结果见表3。
仪器：干燥器、坩埚、万分之一电子天平（AUY-220，岛津）、电热鼓风干燥箱（101-2AB，天津泰斯特）马弗炉（SX-4-10，天津泰斯特）、万用电炉（DL-1，天津泰斯特）中草药粉碎机（F135，天津泰斯特）
测定方法：依照《中华人民共和国药典》2015版药典通则2302。测定用的供试品粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品2g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g ) ,缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500~600℃ ,使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（％)。如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10%硝酸铵溶液2 m l ,使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，残渣照前法炽灼，至坩埚内容物完全灰化。
分析结果：茯苓药材总灰分含量范围为0.11%~0.43%，平均值为0.21%（《中国药典》2015版规定，茯苓药材总灰分含量不得超过2.0%），所采集的茯苓样品都符合药典标准。测定结果见表4。
仪器：干燥器、150ml锥形瓶、移液管、蒸发皿、冷凝管、索氏提取器、万分之一电子天平（AUY-220，岛津）、电热鼓风干燥箱（101-2AB，天津泰斯特）、万用电炉（DL-1，天津泰斯特）中草药粉碎机（F135，天津泰斯特）、恒温水浴锅（DZKW-4，天津泰斯特）
测定方法：依照《中华人民共和国药典》2015版药典通则0221下热浸法。测定用的供试品粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品约2g，精密称定，置 150ml的锥形瓶中，精密加乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀 ，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(％)。
分析结果：茯苓浸出物含量范围为2.52%~4.67%，平均值为3.53%（参照《中国药典》2015版一部茯苓药材项下的规定值，浸出物不得少于2.5%），所采集的茯苓样品都符合药典标准。测定结果见表5。
仪器及试剂：紫外可见分光光度计（SP-192上海光谱），万分之一电子天平（AUY-220，岛津），电子天平（AUW220D，岛津），恒温水浴锅（DZKW-4，天津泰斯特）。水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
对照品溶液制备：取齐墩果酸标准品20.0mg，取适量无水乙醇溶解后转入100ml容量瓶中，定容至刻度线mg/ml得标准溶液。
标准曲线的制备：准确量取0、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml齐墩果酸液于试管中，水浴挥干试剂，分别加入0.4ml的5%香草醛-冰醋酸溶液和1.8ml的高氯酸，置于70℃恒温水浴锅中加热20min中，取出，用流动水冷却，再加入5ml冰醋酸，混匀，在波长541.0nm处测定吸光值，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程为：Y=0.073X+0.3696 ,R2=0.9983.具体见图1。
供试品溶液制备：精密称定茯苓粉末2.0g，置于平底烧瓶中，加入乙酸乙酯60ml，超声35min（功率300w），放冷后，水浴蒸干，用甲醇复溶，转移至10ml容量瓶中，定容至刻度线。
测定方法：精密移取0.2ml齐墩果酸对照品溶液，0.1ml供试品溶液分别置于10ml试管中，水浴挥干试剂，再加入0.4ml5%的香草醛-冰醋酸溶液和1.8ml高氯酸，密塞，70℃水浴20min，流动水冲冷，再加入5ml冰醋酸，摇匀。采用紫外可见分光光度法在541.0nm测定波长下测定。
分析结果：茯苓药材总三萜类成分含量范围为0.17%~0.44%，平均值为0.26%。测定结果见表6。
紫外可见分光光度计（SP-192上海光谱），万分之一电子天平（AUY-220，岛津），电子天平（AUW220D，岛津），恒温水浴锅（DZKW-4，天津泰斯特）TDL-5-A离心机(上海安亭科学仪器)。水为超纯水，浓硫酸、苯酚、乙醇均为分析纯均为分析纯。
（1）供试品溶液制备：取本品细粉约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水80ml，回点对点流2h，抽滤，滤液浓缩至25ml。取8ml，加95%乙醇42ml，醇沉。静置过夜，离心，取沉淀加水溶解并定容至10ml，摇匀，即得。
（2）对照品溶液制备：精密称定无水葡萄糖对照品54.54mg，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，制成每1ml含无水葡萄糖0.5454mg的溶液，即得。
（1）重复性试验：精密吸取供试品液1ml，按测定方法测定，平行操作6份，测定吸光度，计算RSD为0.92%，表明重复性良好。
（2）精密度试验：精密吸取葡萄糖对照品溶液1ml，，按测定方法测定，平行操作6份，测定吸光度，计算RSD为0.13%，表明仪器精密度良好。
（3）稳定性试验：精密吸取供试品溶液1ml，分别于0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h进行测定吸光度，计算RSD为1.2%，表明样品在3小时内显色稳定。
回收率试验：精密吸取供试品0.5ml，然后加入葡萄糖对照品溶液0.5ml，按测定方法测定，平行操作6份，计算平均回收率为95.13%，RSD=0.98%。
3.标准曲线绘制：精密量取对照品溶液0.1ml、0.15ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml，补足水至2ml，混匀，加入4%苯酚溶液1ml，混匀，缓缓加入硫酸7.0ml，40℃水浴加热30min，冰浴5min，取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程为Y=4.1989X+0.1070，R2=0.9984，见图2。
分析结果：茯苓药材茯苓多糖成分含量范围0.1112%~0.4432%，平均值为0.2654%.测定结果见表7.
仪器及试剂：液相色谱仪（LC-20A，岛津），超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；电子天平（AUW220D，AUY-220岛津），茯苓酸对照品（HPLC≥98%，成都德思特生物技术有限公司），乙腈HPLC级，超纯水。其他试剂均为分析纯。
（1）供试品溶液处理：精密称取茯苓样品2 g，加甲醇20 mL，称定重量，超声30 min，放冷，在称定重量，用甲醇补足减失的重量。然后过滤，得滤液，然后精密吸取滤液10ml,置于蒸发皿中，蒸干，后加甲醇溶解并定容至5ml容量瓶。，过膜即得样品。
（2）对照品溶液处理：精密称取茯苓酸对照品0.00305g，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
精密度试验：精密吸取对照品溶液10μl，重复进样6次，以茯苓酸峰面积计算，RSD为0.5%（n=6），结果表明仪器精密度良好。
稳定性试验：精密量取供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、24h各进样10μl，以茯苓酸峰面积计算，RSD为0.9%（n=6）。结果表明供试品溶液在24h内稳定。
重复性试验：精密称定同一批茯苓样品2g，共6份，分别制备供试品溶液，进样测定，分析结果RSD为1.2%，结果表明该法重复性好。
加样回收率：精密称取茯苓酸含量（0.225%）的样品2g，共6份，分别精密加入茯苓酸对照品溶液2ml，注入高效液相测定，计算回收率RSD为1.9%。
30℃；流动相乙腈-0.05%磷酸（78∶22）；体积流量：1.0ml·min-1；检测波长
（4）标准曲线制备：精密量取茯苓酸对照品，分别配置成浓度为12.5μg/ml、30.5μg/ml、61.0μg/ml、122.0μg/ml、305.0μg/ml， 注入液相色谱仪中，按色谱条件测定其峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，回归方程：y = 12043x - 9556.4 R² = 0.9999
分析结果：茯苓药材茯苓酸成分含量范围为0.0443%~0.0892%，平均值为0.0674%。测定结果见表8.
小结：茯苓质量的综合结果表明水分最小的为S1安徽大丁13.06%，最大的为湖南统丁23.13%，这是由于湖南处于雨季，会影响茯苓的水分含量。灰分最小的为S10湖南正心丁0.11%，最大的为S17安徽统丁0.43%，浸出物最小的为S17安徽统丁2.65%，最大的为贵州统块4.67%，茯苓总三萜最小的为S3安徽小丁0.17%，最大的为S16贵州统块0.44%,茯苓酸最小的为S10湖南正心丁0.04%，最大的为S16贵州统块0.098%茯苓多糖最小的为S4湖北统丁0.11%，最大的为S15贵州统丁0.44%。整体数据表明：贵州统块的浸出物、茯苓总三萜、茯苓酸含量最高。但是形状和颜色按传统分类，并不属于等级较高的品类。按照传统等级划分，优等级的茯苓饮片所含的有效成分并不成正比，而且相同地区的茯苓成分含量差距比较大。
通过对茯苓文献调研及茯苓交易市场的走访，了解茯苓的产地种植，采收及药材产地加工方法的正确性。以茯苓的传统交易等级分级为基础，运用现代分析方法对采集的不同级别和规格的茯苓饮片进行了综合质量分析，获得一定的分析数据，比如对茯苓的主要有效成分茯苓水溶性多糖，茯苓酸等含量进行综合分析，为以后茯苓的规格等级划分，提供有效的基础。为茯苓饮片实施优质优价管理提供了科学依据。
我国茯苓资源丰富，临床使用较多。茯苓具有多种药理活性，仅根据传统的性状分类，不考察内在质量对饮片无法科学的体现质量的优劣。若能根据茯苓的药理作用及活性物质角度去研究探讨。在茯苓的种植，生产，加工过程中，对茯苓的各个有效成分及部位进行合理的选择。让茯苓产生更大的价值。
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